第2章
《基因融合：断肢再生的探索孙悦小孙 全集》 发表时间: 2024-12-04
是在绘制两张极为复杂的基因地图，测序仪通过对基因片段的逐一分析，解读其中的核苷酸排列顺序，为后续的融合工作奠定基础。
然后借助基因编辑工具，比如 CR**PR - Cas9 系统，将这两种基因进行精准切割与拼接，构建出融合基因。
在操作 CR**PR - Cas9 时，第一步是设计与目标基因序列互补的引导 RNA（gRNA）。
对于‘neo*last 基因’，我们仔细分析其序列上的特异性位点，设计出能精准定位的 gRNA，这个 gRNA 就像是一把特制的导航钥匙，能够引导 Cas9 蛋白这个‘基因剪刀’准确地找到在‘neo*last 基因’上需要切割的位置。
同样，针对人类的 FGF 基因，也设计出与之匹配的 gRNA。
在超净工作台内，我们通过显微注射技术，将 gRNA 和 Cas9 蛋白复合物注入到含有目标基因的细胞中。
操作时，使用极其精细的显微注射器，先将极微量的 Cas9 蛋白溶液缓慢注入细胞，然后再注入 gRNA 溶液，整个过程必须在极其稳定的环境下进行，稍有震动或者污染都可能导致实验失败。
每一个注射动作都需要高度的专注和稳定的手部操作，因为我们处理的细胞极其微小且脆弱，注射的剂量也必须精确控制在纳升量级。
注射完成后，Cas9 蛋白在 gRNA 的引导下，会在特定的位点切割‘neo*last 基因’和 FGF 基因，使它们产生粘性末端。
接下来就是极为关键的拼接环节。
在超净工作台中，准备一支经过严格高温高压灭菌处理的 0.2 毫升微量离心管，将其放置在冰盒上预冷。
这一步骤中，微量离心管为基因拼接反应提供一个封闭、稳定且便于操作的容器，而预冷则能降低反应体系温度，减缓酶和基因片段的热运动，减少因温度
然后借助基因编辑工具，比如 CR**PR - Cas9 系统，将这两种基因进行精准切割与拼接，构建出融合基因。
在操作 CR**PR - Cas9 时，第一步是设计与目标基因序列互补的引导 RNA（gRNA）。
对于‘neo*last 基因’，我们仔细分析其序列上的特异性位点，设计出能精准定位的 gRNA，这个 gRNA 就像是一把特制的导航钥匙，能够引导 Cas9 蛋白这个‘基因剪刀’准确地找到在‘neo*last 基因’上需要切割的位置。
同样，针对人类的 FGF 基因，也设计出与之匹配的 gRNA。
在超净工作台内，我们通过显微注射技术，将 gRNA 和 Cas9 蛋白复合物注入到含有目标基因的细胞中。
操作时，使用极其精细的显微注射器，先将极微量的 Cas9 蛋白溶液缓慢注入细胞，然后再注入 gRNA 溶液，整个过程必须在极其稳定的环境下进行，稍有震动或者污染都可能导致实验失败。
每一个注射动作都需要高度的专注和稳定的手部操作，因为我们处理的细胞极其微小且脆弱，注射的剂量也必须精确控制在纳升量级。
注射完成后，Cas9 蛋白在 gRNA 的引导下，会在特定的位点切割‘neo*last 基因’和 FGF 基因，使它们产生粘性末端。
接下来就是极为关键的拼接环节。
在超净工作台中，准备一支经过严格高温高压灭菌处理的 0.2 毫升微量离心管，将其放置在冰盒上预冷。
这一步骤中，微量离心管为基因拼接反应提供一个封闭、稳定且便于操作的容器，而预冷则能降低反应体系温度，减缓酶和基因片段的热运动，减少因温度